已有研究表明分子标志物在指导肺癌个体化治疗中起着重要作用。本研究旨在探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)抗微管类药物靶点TUBB3(tubulin, beta 3 class Ⅲ)/STMN1(stathmin 1)基因表达水平与EGFR(epidermal growth factor receptor)、KRAS(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog)、BRAF(v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B)、PI3K(phosphatidylinositol-4, 5-bisphosphate 3-kinase)基因突变的相关性,为NSCLC预后及药物疗效判断提供参考依据。
回顾性分析我院经病理确诊的46例NSCLC患者手术切除的肿瘤标本,通过分支DNA-液相芯片法检测
抗微管靶点TUBB3和STMN1存在很强的共表达性,
抗微管耐药相关因子TUBB3和STMN1与EGFR通路的关键因子突变相关,提示了
It has been proven that biomarkers play a key role in the individualized treatment of lung cancer. Correlations between expressions of TUBB3/STMN1 and gene mutations of epidermal growth factor receptor (
This study total enrolled 46 NSCLC patients. Tumor specimens were resected. The gene expressions of
Co-expressions between TUBB3 and STMN1 are strongly demonstrated, and high expression of TUBB3 always exists as well as high expression of STMN1 (
Antimicrotubule drug resistance factors of TUBB3 and STMN1 may be related with mutations of
肺癌是当前世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的发病率最高,占80%左右[
从53例NSCLC患者中筛选出完整临床病理资料的46例NSCLC手术组织标本(2012年5月-2013年5月)来自于中国人民解放军总医院胸外科,其中男性22例,女性24例,术后病理分期,T1期21例;T2期23例;T3期2例;T4期0例。
新鲜手术组织用10%中性福尔马林固定16 h-24 h,酒精洗涤固定后,送至广州益善医学检验所进行检测。
检测方法为分支DNA-液相芯片法,同时定量检测
采用SurPle®x-xTAG70plex液相芯片技术对组织样品进行
应用SPSS 15.0软件进行统计分析。采用
46例NSCLC患者临床特征描述见
患者基线临床特征描述
Characteristics of patients
Characteristic | No. ( |
Age | 54.36 (mean) |
Median (range), years | 52.50 (median); 35-78 (range) |
Gender | |
Male | 22 (47.83%) |
Female | 24 (52.17%) |
Histological | |
Adeno | 39 (84.78%) |
Squamous | 5 (10.87%) |
Other | 2 (4.34%) |
Differentiated | |
Poorly | 8 (18.18%) |
Moderately-Poorly | 7 (15.91%) |
Moderately | 20 (45.45%) |
Well-Moderately | 5 (11.36%) |
Well | 4 (9.09%) |
Missing | 2 |
Stage | |
Ⅰa | 16 (34.78%) |
Ⅰb | 13 (28.26%) |
Ⅱa | 1 (2.17%) |
Ⅱb | 1 (2.17%) |
Ⅲa | 12 (26.09%) |
Ⅲb | 1 (2.17%) |
Ⅳ | 2 (4.35%) |
Missing | 0 |
Tumor size | |
T1 | 21 (45.65%) |
T2 | 23 (50.00%) |
T3 | 2 (4.35%) |
T4 | 0 (0.00%) |
Missing | 0 |
Clinical nodal status | |
N0 | 30 (65.22%) |
N1 | 5 (10.87%) |
N2 | 10 (21.74%) |
N3 | 1 (2.17%) |
Missing | 0 |
Metastasis | |
Negative | 44 (95.65%) |
Positive | 2 (4.35%) |
Missing | 0 |
采用分支-DNA液相芯片技术对TUBB3及STMN1进行检测,内参基因为一组基因(
采用xTAG技术进行
基因突变分析
Mutations of genes
Gene | Wild Type | Mutated |
97.8% (45) | 2.2% (1) | |
76.1% (35) | 23.9% (11) | |
100% (46) | - | |
76.1% (35) | 23.9% (11) | |
89.1% (41) | 10.9% (5) | |
97.8% (45) | 2.2% (1) | |
100% (46) | - | |
97.8% (45) | 2.2% (1) |
正态性是进行
结果显示,TUBB3及STMN1的mRNA水平的表达与性别、年龄、分化程度、远处转移等病理特征没有明显差异。
基因表达及突变与临床病理特征的相关性。
Correlation between gene and pathology characteristics
Gender | 0.201, 27 | -0.248, 63 | 0.207, 2 | 0.119, 2 | 0.111, 9 | 0.164, 74 | |
0.190, 2 | 0.103, 7 | 0.188, 3 | 0.452, 1 | 0.480, 5 | 0.297, 2 | ||
Age | 0.204, 65 | -0.385, 91 | 0.263, 75 | -0.121, 14 | 0.151, 28 | 0.218, 86 | |
0.182, 7 | 0.700, 0 | 0.091, 5 | 0.444, 7 | 0.338, 9 | 0.163, 8 | ||
Stage | 0.216, 07 | -0.414, 09 | 0.396, 16 | -0.161, 33 | 0.290, 01 | 0.195, 53 | |
0.158, 9 | 0.102, 0 | 0.094, 0 | 0.307, 4 | 0.062, 5 | 0.214, 6 | ||
Distant metastasis | 0.360, 54 | -0.011, 13 | 0.290, 82 | -0.028, 44 | -0.043, 51 | 0.472, 17 | |
0.076, 2 | 0.942, 8 | 0.061, 7 | 0.858, 1 | 0.784, 4 | 0. 162, 0 | ||
Differentiation | 0.187, 74 | -0.130, 66 | 0.0512, 9 | 0.065, 88 | -0.181, 91 | 0.197, 8 | |
0.222, 3 | 0.397, 9 | 0.747, 0 | 0.678, 5 | 0.248, 9 | 0.209, 3 | ||
Smoking history | 0.137, 42 | 0.448, 06 | 0.254, 19 | 0.745, 61 | 0.177, 22 | 0.315, 78 | |
0.373, 7 | 0.062, 3 | 0.104, 3 | 0.001, 2 | 0.069, 2 | 0.071, 6 |
采用
基因相关性分析
Correlations between genes
Gene( | ||
0.138, 11 | -0.222, 17 | |
0.371, 3 | 0.147, 2 | |
0.018, 6 | 0.179, 8 | |
0.904, 6 | 0.242, 9 | |
-0.419, 53 | -0.101, 27 | |
0.004, 6 | 0.513, 1 | |
0.172 | 0.312, 99 | |
0.264, 2 | 0.038, 6 | |
1 | 0.408, 03 | |
0.006 | ||
0.408, 03 | 1 | |
0.006 |
在多重检验时需将检验水准进行调整,结果才具有更高的重复性。本文中
随着人类基因组学及功能基因组学研究的不断深入,分子标志物指导肺癌个体化治疗已成趋势。根据患者基因状况等个体差异来制订针对性的治疗方案,可以避免不当治疗及无效治疗,而确定个体差异则主要通过检测分析患者特定基因的表达水平或突变来实现。
多项研究发现切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、核糖核苷酸还原酶M1(RRM1)、微管蛋白β-Ⅲ(TUBB3)、Stathmin 1(STMN1)、胸苷酸合成酶(TYMS)、与NSCLC的化疗疗效直接相关[
细胞内微管蛋白分α、β两个亚型,是有丝分裂时纺锤体的基本组成单位,也是抗微管药物的主要作用靶点。研究显示,TUBB3编码的Tubulin-Ⅲ(β-3型微管蛋白)与抗微管化疗药敏感性的关系最密切。高TUBB3表达水平与长春瑞滨的耐药性和生存期较短相关[
肿瘤细胞EGFR信号通路上基因的突变状态决定着EGFR靶向药的疗效,研究得出与其疗效有关的突变位点主要有
本研究主要分析
本研究中分析了TUBB3和STMN1和EGFR信号通路的关系。检测mRNA水平采用的方法是分支-DNA液相芯片,检测过程中无需进行RNA抽提、纯化和逆转录等,一方面检测结果基本不受样品中RNA降解等因素的影响,保证了检测结果的准确性;另一方面,液相芯片以多个持家基因作对照(
本研究检测基因突变的方法是xTAG液相芯片方法,该方法可同时检测EGFR通路70个位点,真正做到多靶标联合检测。与其他技术相比,该技术具有灵敏高、特异性强、量化可重复、操作简便、结果判定标准化等突出优势,实现了高度灵敏、重复性好的多指标基因突变检测在临床肿瘤靶向治疗的运用。
在选择可靠技术的前提下,我们对结果进行了分析。通过分析基因与临床病理特征的相关性发现,由于本研究中样本量较少,没有发现基因与临床病理特征如性别、年龄、肿瘤大小等的明显差异。由于随访数据还在进行,本文无法分析TUBB3及STMN1与预后的相关性。
针对EGFR通路的研究中,本文发现EGFR敏感性突变(
关于TUBB3/STMN1与
本研究的
这些结果显示EGFR信号通路的关键因子EGFR、KRAS在调控
本研究没有显示出两个指标与
本研究初步分析了TUBB3/STMN1表达与EGFR信号通路的关键因子